Fils d'Ariane

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Soutenance de thèse de Elodie HENRIET

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photo ADN

Date -
Heure 10h00 - 12h00
Adresse

Amphithéâtre Charles Sadron -
3E Avenue de la Recherche Scientifique - Campus CNRS
France

Contact
Lien http://www.univ-orleans.fr/fr/univ/recherche/temps-forts/soutenances-de-theses-…

Les microARNs sont maintenant reconnus comme des régulateurs majeurs de l’expression des gènes à l’échelle post-transcriptionnelle. Cette classe d’ARN non codant contrôle de nombreux processus biologiques, que ce soit au cours du développement embryonnaire qu’au cours de la vie adulte. De par leur mode de régulation multigénique, les microARNs sont des cibles biologiques adaptées aux stratégies de criblage de librairies d’actifs d’intérêt fondamental et pharmacologique. Au laboratoire, nous avons conçu une sonde d’imagerie bioluminescente inductible par les microARNs, dénommée RILES pour « RNAi-Inducible Luciferase Expression System », permettant de générer des signatures optiques en fonction du niveau d’activité des microARNs dans les cellules ou les tissus. Nous avons montré que le système RILES se prête particulièrement bien aux stratégies de criblage de banques de mimiques synthétiques de microARNs en offrant spécificité, sensibilité et rapidité d’exécution. Au cours de ce doctorat, nous avons mis en place une stratégie de criblage RILES sous contrôle de l’axe de régulation TGF-β1/microARN-21, en raison de son rôle clé dans la ré-épithélialisation des plaies cutanées. Le criblage d’une extractothèque de 37 extraits de plantes médicinales sur les kératinocytes humains nous a permis d’identifier trois extraits bruts, dont celui du Silybum marianum (L.) Gaertn. Ce dernier a fait l’objet d’une caractérisation fonctionnelle poussée. Nous avons montré que l’effet du Silybum marianum (L.) Gaertn sur l’expression du microARN-21-5p est dépendant d'une fraction composée, entre autres, de six flavonolignanes appelée silymarine (SM). Des essais d’immunoprécipitation de la protéine Argonaute 2 couplée à la RT-qPCR ont permis de révéler que la SM régule le microARN-21 selon un mode de régulation original. Celui-ci met en jeu une augmentation de la prise en charge du microARN-21 par le complexe d’interférence à ARN (RISC) et conduit à la répression des cibles du microARN-21 au niveau post-transcriptionnel. Afin de caractériser l’effet biologique de la SM dans les kératinocytes humains, nous avons privilégié une approche de séquençage à haut débit du transcriptome (RNA-seq) puis validé les signatures transcriptomiques obtenues par des tests fonctionnels. Nos travaux ont montré que la SM bloque le cycle cellulaire en phase G0/G1 et inhibe la différenciation deskératinocytes via l’inhibition de l’expression de Notch3, des kératines K1 et K10, de l’involucrine, de la filaggrine et de la loricrine. De façon inattendue, la SM active la synthèse des lipides en partie en inhibant la phosphorylation d’AMPK et en augmentant l’activité transcriptionnelle de PPARγ. Par ailleurs, la SM ralentit la migration cellulaire en inhibant l’expression génique de MMP3 et la fibronectine au profit de celle de TIMP3 et l’E-cadhérine. Enfin, la SM inhibe les réponses inflammatoires, en partie, en bloquant l’activité transcriptionnelle de NF-ƙB. Ces nouvelles données moléculaires nous ont incité à évaluer l’effet protecteur de la SM dans un modèle murin de psoriasis induit par l’imiquimod (IMQ). Nos résultats ont montré que le traitement des peaux de souris avec la SM conduit à une atténuation significative de la sévérité du psoriasis. L’examen histologique des coupes de peaux de souris a confirmé les changements morphologiques : diminution de l’acanthose, de l’hyperkératose,de la parakératose et de l’infiltration dermique de cellules inflammatoires. A l’échelle moléculaire, la SM restaure l’expression génique des principaux marqueurs moléculaires de l’inflammation, de la différenciation des kératinocytes et du métabolisme lipidique. Bien que ces travaux méritent d’être approfondis, la SM offre une méthode alternative et/ou complémentaire aux traitements pharmacologiques actuels pour la prise en charge des patients souffrant de psoriasis.