Soutenance de thèse de Khalid BOUSSAINE

Les récepteurs cholinergiques jouent un rôle important dans le système nerveux des arthropodes. Des études récentes ont démontré que des neurones cholinergiques sont impliqués dans le contrôle des glandes salivaires chez la tique Ixodes ricinus. Les récepteurs nicotiniques de l'acétylcholine pourraient également constituer des cibles pour des composés acaricides. Les deux types de récepteurs cholinergiques : nicotiniques (nAChRs) et muscariniques (mAChRs) ont été identifiés dans le système nerveux central de la tique, le synganglion. Deux mAChRs (A et B), ainsi que les séquences codantes de différentes sous-unités de nAChRs, dont la sous-unité Iricα6, sont présents dans le synganglion. Afin d’étudier les propriétés pharmacologiques des récepteurs cholinergiques neuronaux de la tique Ixodes ricinus, j’ai mis au point un protocole permettant la dissociation du synganglion et l’isolement des neurones. J’ai identifié deux populations neuronales distinctes, classées selon leur morphologie et leur taille (~25 μm et ~35 μm). L’analyse pharmacologique par patch-clamp a confirmé la présence de mAChRs et de nAChRs dans ces deux types neuronaux, grâce à l’application d’agonistes spécifiques (muscarine et nicotine). L’exposition à 1 mM d’acétylcholine, de muscarine ou de nicotine a induit des courants entrants dans les deux populations, avec des amplitudes plus importantes dans les neurones de ~35 μm que dans ceux de ~25 μm. Dans un second temps, j’ai réalisé une expression hétérologue des deux mAChRs (A et B) et du nAChR homomérique Iricα6 dans des ovocytes de Xenopus Laevis, puis caractérisé leurs propriétés pharmacologiques par la technique de double microélectrode en voltage imposé (TEVC). Nos résultats ont démontré que les deux types de mAChRs sont activés par l’acétylcholine et la muscarine. Nous avons aussi montré que le mAChR-A est sensible à l'oxotrémorine et à la méthacholine alors que mAChR-B est insensible. Le récepteur Iricα6 est activé par l’acétylcholine et présente une dépendance au voltage des courants induits, agissant comme un canal cationique non sélectif. Ce récepteur est bloqué par les antagonistes nicotiniques méthyllycaconitine et dihydro-β-érythroïdine. De façon inattendue, l’α-bungarotoxine et la mécamylamine se comportent toutefois comme des agonistes. Pour conclure, les travaux réalisés au cours de cette thèse ont permis d’isoler les neurnes de la tique Ixodes ricinus et d’étudier les propriétés pharmacologiques des récepteurs cholinergiques exprimés dans le synganglion.