Soutenance de thèse de Laurine RÉSET

Les produits naturels sont une source majeure de composés bioactifs avec des intérêts pharmaceutiques et cosmétiques. Leurs analyses restent complexes en raison de la diversité structurale et stéréochimique des molécules présentes. La chromatographie en phase supercritique (SFC), efficace et respectueuse de l’environnement, peut être couplée en deux dimensions (SFC-SFC) pour augmenter la puissance séparative face à ces mélanges complexes. Cette thèse décrit le développement d’un système SFC-SFC en mode multiple heart-cut. En plus de la mise en place du système, différents paramètres ont été optimisés : volumes morts, boucles de transfert, pression et composition des phases mobiles, sur colonnes polaires et apolaires. Ces travaux ont permis de déterminer les combinaisons de co-solvant compatibles, permettant un transfert efficace et reproductible entre les deux dimensions, tout en préservant la forme des pics et la résolution. Le système a été appliqué aux échantillons de Citrus aurantium L., plante riche en flavanones (néohespéridine, naringine). Différentes parties de la plante, dont celles du fruit à trois stades de maturité, leurs origines et leurs conditions de séchage ont été comparées. Une séparation achirale en première dimension a été développée pour séparer les flavonoïdes et une séparation stéréosélective (sur colonne chirale) en seconde dimension pour déterminer leurs excès diastéréoisomériques. Afin d’appliquer la méthode à un nombre plus large de flavonoïdes, un criblage de colonnes chirales a été réalisé. Celui-ci a permis d’identifier des colonnes adaptées selon le degré de glycosylation des flavonoïdes. Finalement, ces premiers développements instrumentaux ouvrent la perspective d’un couplage SFC×SFC en mode compréhensif pour une analyse plus exhaustive et rapide des matrices naturelles complexes.