Soutenance de thèse de Nastassja BURRINI

La reconnaissance moléculaire des sucres (carbohydrates) est un processus hautement spécifique et compliqué, car elle est basée sur la mise en place d’interactions non-covalentes essentielles pour la fonctionnalité biologique. Au niveau moléculaire, cette reconnaissance implique des lectines ou des anticorps qui participent à la communication cellulaire et à la défense immunitaire, mais également des enzymes catalysant des transformations de ces sucres. D’un point de vue plus global, ces enzymes sont comparables aux lectines et anticorps, en considérant la spécificité et la reconnaissance des sucres. Le premier objectif de cette thèse a consisté au développement d’enzymes modifiées permettant de mimer la reconnaissance des sucres par les lectines. Dans ce manuscrit, une nouvelle glycoside hydrolase (GH), -D-galactosidase issue de Dictyoglomus thermophilum a été clonée, exprimée, caractérisée, et mutée au niveau de son résidu acide/base catalytique. Ces mutants s’est rajouté à la bibliothèque de mutants de GH précédemment développés au laboratoire. Toutes ces enzymes, utilisées comme thioglycoligases, ont tout d’abord permis la synthèse de dérivés de S-glycosidesfluorscent et non toxiques. Dans l’optique d’étendre cette bibliothèque d’enzymes, une série de mutation a été réalisée sur les résidus du site actif d’une autre GH (-L-Rhamnosidase), ce qui a permis de déchiffrer l’influence de ces mutations sur la spécificité de liaisons de ces variants. Enfin, les GH mutées composant cette bibliothèque ont été utilisés comme néolectines, et leur spécificité vis-à-vis des sucres a été déterminées en utilisant des glycanes greffés à la surface de protéines (BSA), ou sur des petites vésicules unilamellaires (VUSs), permettant de mettre en évidence leur utilisation comme mime de lectines dans la reconnaissance de sucres.